2013年3月份，“H7N9”在上海和安徽率先發(fā)現(xiàn)，隨后在江蘇，浙江傳播蔓延。生物學家已經(jīng)檢測出這種病毒的結(jié)構確認其毒株了。北京熙縝隆博環(huán)保科技有限公司代理的儀器會成為您的*，歡迎有意購買者撥打公司熱線電話010-68940148。

一、單鏈構型多態(tài)性(SSCP)

作為檢測基因變異的手段已得到廣泛應用，其原理是單個核苷酸的置換引起DNA單鏈構象改變,在非變性電泳中足以導致泳動率變化。

二、血清學檢測

2.1病毒中和試驗（NT） 作為經(jīng)典方法，病毒中和實驗操作繁瑣、耗時、費料，臨床幾乎不用。

2.2血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗AIV 能夠與雞紅細胞發(fā)生凝集現(xiàn)象，這種紅細胞凝集現(xiàn)象又可被特異性免疫血清所抑制，即紅細胞凝集抑制試驗。血凝和血凝抑制試驗可以鑒定病毒、檢測血清中的抗體水平。用抗不同血凝素的抗血清，由血凝抑制試驗來確定HA亞型。

2.3神經(jīng)氨酸酶抑制（NI）試驗微量神經(jīng)氨酸酶（NA）抑制劑抑制NA的活性，并以半抑制濃度IC50鑒定NA亞型。該方法成本低，適于大規(guī)模地應用。

2.4瓊脂凝膠擴散試驗（AGP） 用于檢測AIV共同抗原核蛋白或基質(zhì)蛋白。由于所有的AIV 都具有型特異性共同抗原，用一種AIV的抗原或抗血清*可對所有AIV 的抗體或抗原進行鑒定。免疫雙向擴散及免疫電泳中以沉淀線判定可以定性，免疫單輻射擴散試驗可以定量。

2.5免疫熒光技術(IFT) 將抗原或抗體標記上熒光素，再進行抗原抗體反應。*早用于流感病毒是鑒定和定位病毒感染細胞中特異性的抗原、核蛋白(NP)或基質(zhì)蛋白(MP)抗原。用NP抗原的熒光抗體染色，主要出現(xiàn)核內(nèi)熒光；用MP抗原的熒光抗體主要出現(xiàn)胞質(zhì)熒光，核內(nèi)也可出現(xiàn)部分熒光。

2.7酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) 運用ELISA原理建立的AIV檢測方法較多，如用單克隆抗體介導的、經(jīng)生物素一親和素系統(tǒng)放大的H5亞型禽流感病毒捕獲ELISA檢測方法，為進一步研究檢測試劑盒提供基礎。AIV抗體膠體金檢測試紙條則是膠體金免疫層析分析法，用純化病毒與膠體金顆粒偶聯(lián)，吸附在玻璃纖維上制作而成，不需要其他試劑,一步完成,反應時間只需要幾分鐘(5～10min)，是一種檢測微量AIV抗體快速、簡便的方法。

三、病原學檢測

雞胚分離培養(yǎng)是檢測病禽組織中AIV的一種經(jīng)典、準確、敏感的病原學診斷方法，可以作為金標準，特異性和敏感度均可以達到*。

四、核酸擴增方法

4.1RTPCR基于MP、NP 基因的高度保守區(qū)的引物，RTPCR可以鑒定AIV。為提高擴增的靈敏度和特異性，也可采用巢式或半巢式RTPCR。

4.2多重RTPCR(mRTPCR)mRTRCR是在RTPCR基礎之上實現(xiàn)單管多檢的相對快速和經(jīng)濟的檢測方法。

4.3Realtime RTPCR(RRTPCR)運用特異性的熒光水解探針的RRTPCR方法可使檢測時間縮短為4 h。Lee等建立的檢測H5、H7亞型AIV的RRTPCR方法，與傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法比較，并以EID50（50%雞胚致病指數(shù)）為評價指標，呈正相關（r  = 0972），T 檢驗無顯著差別（P >021）。其重復性試驗呈正相關（r = 0902），靈敏度H5為1 fg或 10２ RNA拷貝，H7為10-1 fg或10 RNA拷貝，所測病毒濃度均低于1010 EID50，該靈敏度高于培養(yǎng)方法。

4.4依賴核酸序列的擴增（NASBA）NASBA是一種快速、等溫的RNA 擴增技術，整個反應有賴于AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、T7 RNA 多聚酶和核酸酶H(RNase H)共同協(xié)作而完成，不需特殊儀器，不需溫度循環(huán)，是以轉(zhuǎn)錄為基礎，單鏈核苷酸的連續(xù)擴增，其反應產(chǎn)物是單鏈RNA。擴增產(chǎn)物與磁珠上的捕捉探針及釕標記的電化學發(fā)光寡核苷酸探針雜交后，形成復合物，經(jīng)NucliSens閱讀器直接檢測電化學發(fā)光強度。Collins等檢測了亞歐地區(qū)H5亞型AIV，同時還鑒別出高致病及低致病H5亞型。Lau 等建立的NASBA技術可以檢測H1～H15亞型的AIV，并能區(qū)分出H5及H7亞型，整個過程從核酸分離、擴增、檢測在6 h 以內(nèi)，靈敏度與雞胚培養(yǎng)相當。

4.5環(huán)介導的等溫擴增（loopmediated isothermal amplification, LAMP）    Poon等介紹了一種新的更加簡便的擴增方法，即環(huán)介導的等溫擴增,特異性地針對6個獨立的結(jié)合位點設計兩對引物擴增，以看家基因或外源性RNA分子作為陽性對照。由于反應中產(chǎn)生大量焦磷酸鎂，可以肉眼判斷結(jié)果，無需凝膠電泳。作者用該方法檢測了SARS病毒后，又檢測了H1～H3的AIV，與常規(guī)方法比較符合率為*。

五、基因芯片

將RTPCR獲得的cDNA固化于芯片，利用核酸探針技術構建的檢測流感病毒A、B及其亞型的芯片平臺， Cy3、Cy5標記的核酸探針與靶DNA雜交，可以進一步鑒別混合體系中擴增產(chǎn)物。Li等用cDNA芯片及mRTPCR對流感病毒進行檢測及分型，結(jié)果顯示cDNA芯片為基于PCR的診斷技術提供了補充，因為基于PCR的方法，直接從DNA擴增片段大小不足以證明是目的產(chǎn)物。

病毒分離培養(yǎng)和血凝抑制試驗經(jīng)常作為評價新的檢測 AIV方法的對照，但病毒分離培養(yǎng)耗時長，至少需7 d，不利于快速診斷，病毒分離的實驗條件要求較高，同時有高致病性的危險，對毒株的檢測及管理上要嚴格考慮生物安全措施。AIV在雞胚培養(yǎng)過程中還可能發(fā)生發(fā)生變異。血凝及血凝抑制試驗特異性好，但其操作相對繁瑣，同時必須具備一定血凝效價的標準病毒和新鮮制備的紅細胞。血清學檢查對*后確診有回顧性診斷價值，一般只能在發(fā)病23周甚至更長時間才能有抗體陽性出現(xiàn)。由于 AIV 血清型眾多，新的變異株不斷出現(xiàn)，制備血清型特異性單克隆抗體相對困難，且在各種免疫接種的情況下，血凝抑制試驗等血清學診斷方法也會失去作用。核酸擴增技術（NAT）檢測 AIV，選擇好靶基因和引物及優(yōu)化反應參數(shù)，均可獲得高靈敏度和特異性。對于血清型眾多的 AIV，不同亞型致病性不同，宿主分布不同，故快速、特異地分型在 AIV 診斷中顯得尤為重要，而當前的核酸擴增技術尚不能高通量地鑒別出所有 HA 或 NA 的已知亞型。RTPCR 方法能夠獲得所有 AIV 的已知 HA 亞型，但*終結(jié)果尚需借助測序方法，不能作為常規(guī)檢測手段。要實現(xiàn)高通量、大規(guī)模的檢測，有望借助生物芯片這項技術。生物芯片正逐步應用于細菌及病毒的檢測，它不僅能克服 PCR 擴增技術中難題，對 PCR 擴增技術還能起到補充作用。目前人們針對病毒，甚至 AIV 檢測芯片不斷優(yōu)化雜交條件；將核酸擴增產(chǎn)物片段化，以減少核酸二、三級結(jié)構效應對雜交的影響；以及對芯片載體結(jié)構和檢測方法進行改進，都為建立快速、靈敏、特異的 AIV 檢測方法提供平臺。